Αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης: Διαφορά μεταξύ των αναθεωρήσεων
Περιεχόμενο που διαγράφηκε Περιεχόμενο που προστέθηκε
Image |
→Στάδια: εκκινητών |
||
Γραμμή 11:
Ένας πλήρης κύκλος μιας PCR αντίδρασης περιλαμβάνει τρία στάδια:
* Αποδιάταξη του DNA (''denaturation'')
* Προσαρμογή των
* Επιμήκυνση των εκκινητών (''extension'').
Ένας πλήρης τέτοιος κύκλος περιλαμβάνει επώαση των δειγμάτων σε τρεις διαφορετικές θερμοκρασίες και γίνεται στις μέρες μας αυτόματα από ειδικά μηχανήματα τους [[θερμοκυκλωτές]] (''thermal cyclers''). Σε μια τυπική αντίδραση, το δίκλωνο DNA αποδιατάσσεται με θέρμανση στους 95°
▲Ένας πλήρης τέτοιος κύκλος περιλαμβάνει επώαση των δειγμάτων σε τρεις διαφορετικές θερμοκρασίες και γίνεται στις μέρες μας αυτόματα από ειδικά μηχανήματα τους [[θερμοκυκλωτές]] (thermal cyclers). Σε μια τυπική αντίδραση, το δίκλωνο DNA αποδιατάσσεται με θέρμανση στους 95° C. Στη συνέχεια οι εκκινητήρες σε περίσσια προσαρμόζονται με [[υβριδισμός|υβριδισμό]] στις συμπληρωματικές αλληλουχίες του [[DNA]] εκμαγείου με ψύξη του δείγματος στους 50 – 60° C. Ακολουθεί επώαση στους 72° C για την επιμήκυνση των εκκινητήρων από μία θερμοάντοχη πολυμεράση, παρουσία των τεσσάρων [[νουκλεοτίδιο|νουκλεοτιδίων]].
Καθώς η διαδικασία επαναλαμβάνεται, οι νεοσύστατοι κλώνοι με τη σειρά τους χρησιμοποιούνται ως εκμαγεία για την ''in vitro'' σύνθεση του DNA. Μετά από μερικούς κύκλους το επικρατές προϊόν είναι ένα DNA θραύσμα που το μέγεθος του οποίου αντιστοιχεί στην μεταξύ των δύο αρχικών εκκινητήρων απόσταση. Στη πράξη 20 με 30 κύκλοι της αντίδρασης είναι αρκετοί για την αποτελεσματική ενίσχυση του DNA θραύσματος. Σε κάθε κύκλο που διαρκεί περίπου πέντε λεπτά η ποσότητα του DNA διπλασιάζεται. Η όλη διαδικασία κλωνοποίησης ενός [[DNA]] θραύσματος σε ένα ''in vitro'' σύστημα (χωρίς κύτταρα) διαρκεί μερικές ώρες, σε σχέση με τις μερικές μέρες που απαιτούνται για τις ''in vivo'' διαδικασίες [[Κλωνοποίηση|κλωνοποίησης]].<ref>{{Cite web |url=http://www-jcb.bio.auth.gr/mor_biol/nucleicacids/frames/na55.htm |title=Αρχειοθετημένο αντίγραφο |accessdate=2007-09-04 |archiveurl=https://web.archive.org/web/20070911220944/http://www-jcb.bio.auth.gr/mor_biol/nucleicacids/frames/na55.htm |archivedate=2007-09-11 |url-status=dead }}</ref>
| |||